枢经推拿对神经病理性疼痛大鼠 TLR8/ERK 信号通路及LncRNA-GAS5 的影响及作用机制

摘要: 背景　近年来，枢经推拿在治疗神经病理性疼痛方面展现出较好的疗效，但其具体作用机制尚未充分阐明。目的　以 L5 脊神经结扎而成的神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象，根据各项研究指标观察枢经推拿对大鼠的镇痛作用，探讨其是否通过影响 LncRNA-GAS5 进而调控脊髓背角神经元凋亡达到镇痛效果。方法　实验于 2021 年 1—6 月在广西中医药大学、广西大学动物医学实验中心完成。选取健康雌性 SD 大鼠 120 只，按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组，每组 24 只；假手术组、模型组、假推拿组和枢经推拿组通过结扎 L5 脊神经来制备神经病理性疼痛大鼠模型。造模 24 h 后，假手术组暴露 L5 脊神经几分钟，不予结扎，逐层缝合关闭伤口；假推拿组轻抚大鼠双后肢 18 min；枢经推拿组用自备按摩仪循序刺激两侧足少阳胆经上的环跳、阳陵泉、悬钟三穴，刺激力量为 5 N，频率 2 Hz，每穴、每法干预 1 min，双侧 6 个穴位，3 种手法，共计 18 min；正常组、模型组正常喂养及观察，不施加任何干预。于造模前及造模后 1、3、7、14 d 分别进行行为学检测（机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期）；分别于干预 7、14 d，随机抽取 12 只进行取材检测脊髓组织中介导 TLR8/ERK 信号通路相关蛋白表达情况（脊髓组织 Bcl-2、Caspase-3、ERK、TLR8 蛋白表达水平，LncRNA-GAS5、miR-21 基因表达水平）。结果　（1）行为学方面，模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠造模后 1、3、7、14 d 机械缩足反射阈值均低于正常组（P<0.05）；假推拿组、枢经推拿组的机械缩足反射阈值在造模后 14 d 均高于模型组（P<0.05）；枢经推拿组造模后 7、14 d 机械缩足反射阈值高于假推拿组（P<0.05）。假手术组、枢经推拿组在造模后 1、3、7 d 热缩足反射潜伏期均低于正常组（P<0.05）；假推拿组、枢经推拿组在造模后 7、14 d 热缩足反射潜伏期均长于模型组（P<0.05）；枢经推拿组在造模后 14 d 热缩足反射潜伏期长于假推拿组（P<0.05）。（2）信号通路相关蛋白以及基因表达水平方面，造模后 7 d，正常组 Bcl-2 蛋白表达水平低于其余各组（P<0.05）；枢经推拿组的 Bcl-2 蛋白表达水平高于模型组，Caspase-3、ERK、TLR8 蛋白表达水平均低于模型组（P<0.05）；枢经推拿组的 Bcl-2、Caspase-3、ERK、TLR8 蛋白表达水平低于假推拿组（P<0.05）；造模后 14 d，枢经推拿组的 Bcl-2 蛋白表达水平仍高于模型组，Caspase-3、TLR8 蛋白表达水平仍低于模型组，而 ERK蛋白表达水平高于模型组（P<0.05）。造模后 7d，假推拿组和枢经推拿组 LncRNA-GAS5基因表达水平均高于模型组，miR-21 基因表达水平均低于模型组（P<0.05）；枢经推拿组 LncRNA-GAS5 基因表达水平高于假推拿组，miR-21 基因表达水平低于假推拿组（P<0.05）；造模后 14 d，模型组 lncRNA-GAS5 基因表达水平低于正常组，枢经推拿组与假推拿组 lncRNA-GAS5 基因表达水平高于模型组（P<0.05）；枢经推拿组与假推拿组miR-21 基因表达水平高于模型组（P<0.05）。结论　枢经推拿手法对神经病理性疼痛大鼠起到一定的镇痛效果，初步推测镇痛作用机制可能是通过升高 LncRNA-GAS5 的表达来吸附 miR-21 介导 TLR8/ERK 通路相关蛋白抑制神经元凋亡，虽然其具体机制未明确证实，但 LncRNA-GAS5 有望成为以后治疗神经病理性疼痛的新靶点。